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基因转染动物细胞的方法有哪些?

作者:山东维真生物科技有限公司 2021-08-03T08:53 (访问量:10868)

①磷酸钙共沉淀法 用Ca2+沉淀磷酸离子和DNA,沉积在细胞质膜上的DNA可能通过吞噬作用被细胞吸收。

②DEAE-葡聚糖 它能结合DNA并促使细胞吸收。

③脂质体法 利用类脂经超声波、机械搅拌等处理,形成双脂层小囊泡,将DNA溶液包裹在内,通过与细胞质膜融合而使DNA进入细胞。

④脂质转染法 用人工合成的阳离子类脂与DNA形成复合性,借助类脂穿过质膜而将DNA导入细胞内。

⑤电穿孔法 在脉冲高压电场作用下将质膜瞬间击穿,DNA得以进入细胞,细胞膜随即修复正常。

⑥基因枪法 采用高速微弹发射装置,常用直径为1 μm左右的惰性重金属粉末作为微弹,如钨粉或金粉,其上沾有DNA,置于档板的凹穴内。当用火药或高压气体发射弹头撞击档板时,微弹即以极高的速度射向靶目标。

在以上诸方法中,磷酸钙共沉淀法成本低、操作方便,但效率低;脂质转染法和电穿孔法,前者需要昂贵的试剂,后者需要特殊的仪器,但效率高,现在较常用。对哺乳动物受精卵等较大的细胞,导入外源DNA可以用显微注射法,该方法效率极高,还可直接将DNA送入核内,但需要昂贵仪器,且技术复杂不易掌握。

除上述几种方法外,还可采用病毒介导的转染方法,更适用于较难转染的细胞,目前常用的有腺病毒、慢病毒及腺相关病毒(AAV),可根据以下3种病毒的特性选择合适的载体工具:

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